酚氧化酶和多酚氧化酶(抗坏血酸相关酶活性的测定)
一、抗坏血酸过氧化物酶什么颜色
淡黄色。抗坏血酸过氧化物酶在处于正常状态下的颜色是淡黄色的。抗坏血酸过氧化物酶是植物活性氧代谢中重要的抗氧化酶之一，尤其是叶绿体中清除H2O2的关键酶，又是维生素C代谢的主要酶类。
二、抗坏血酸相关酶活性的测定
实验四抗坏血酸含量及抗坏血酸过氧化物酶活性的测定
一、抗坏血酸含量测定
【原理】
还原型抗坏血酸(AsA)可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉(4，7－二苯基－1，10－菲咯啉，BP)反应形成红色螯合物。在534nM波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。脱氧抗坏血酸(DAsA)可由二硫苏糖醇(DTT)还原成AsA。测定AsA总量，从中减去还原型AsA，即为DAsA含量。
【仪器与用具】
离心机；分光光度计；研钵；试管。
【试剂】
5％三氯乙酸(TCA)；
20％TCA；
无水乙醇溶液；
0�4％磷酸—乙醇溶液；
0�5％BP—乙醇溶液；
0�03％FeCl3—乙醇溶液；
0�6g／L DTT；
NA2HPO4—NAOH溶液：以0�2Mol／L NA2HPO4和1�2Mol／L NAOH等量混合；
60MMol／L DTT—乙醇。
【方法】
1.制作标准曲线配制浓度为2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L，12mg/L，14Mg／L的AsA系列标准液。取各浓度标准液1�0Ml于试管中，加入1�0Ml 5％TCA、1.0ml乙醇摇匀,再依次加入0�5Ml 0�4%H3PO4—乙醇、1�0Ml 0�5％BP—乙醇、0�5Ml 0�03%FeCl3—乙醇，总体积5�0Ml。将溶液置于30℃下反应90Min，然后测定A534。以AsA浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。
2.提取取植物叶片1�0g，按1∶5(W／V)加入5%TCA研磨，4000r／Min离心10Min，上清液供测定。
3.测定
(1)AsA测定取1.0Ml样品提取液于试管中，按上述相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。
(2)DAsA测定向1.0Ml样品液中加入0�5Ml 60MMol／L DTT—乙醇溶液，用NA2HPO4—NAOH混合液，将溶液PH调至7～8,置于室温下10Min，使DAsA还原。然后加入0�5Ml 20％TCA，把PH调至1～2。按AsA相同方法进行测定，计算出总AsA含量，从中减去AsA,即得DAsA含量。
二、抗坏血酸过氧化物酶(AsA－POD)活性
【原理】
AsA－POD催化AsA与H2O2反应，使AsA氧化成单脱氢抗坏血酸(MDAsA)。随着AsA被氧化，溶液中290nM波长下的消光值(A290)下降，根据单位时间内A290减少值，计算AsA－POD活性。AsA氧化量按消光系数2�8(MMol／L)／CM计算，酶活性可用每克鲜重每小时氧化AsA的微摩尔数μMol／g·H表示。
【仪器】
离心机；紫外分光光度计；研钵；试管。
【试剂】
50MMol／L K2PO4—KH2PO4缓冲液(PH7�0，内含0�1MMol／L EDTA－NA2)�
0�3MMol／L AsA；
20μMol／L AsA；
0�06MMol／L H2O2。
【方法】
1�酶液制备取1�0g植物叶片剪碎，按1∶3(W／V)加入预冷的50MMol／L K2HPO4—KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用两层纱布过滤，滤液在4000r／Min下离心10Min，上清液作酶粗提液供测定。
2.酶活性测定3Ml反应混合液中含50MMol／L K2HPO4—KH2PO4缓冲液(PH7�0)，0.1MMol／L EDTA－NA2，0.3MMol／L AsA，0�06MMol／L H2O2和0.1Ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10～30s内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性。
【思考题】
1.抗坏血酸在植物体内有何生理意义�
2.简述抗坏血酸过氧化物酶活性的测定原理。
三、过氧化物酶的测定中钼酸铵的作用
过氧化物酶的测定中钼酸铵的作用
钼酸铵是一种显色剂,能够定量测定过氧化物的质量,加在这里是要精确测定过氧化物含量。
钼酸铵（又特种钼酸铵；(T-4)-钼酸铵；四钼酸铵；钼酸二铵；）易于纯化、易于溶解、易于热解离，而且，热解离出的NH3气随加热可充分逸出，不再污染钼产品。因而，钼酸铵广泛用作生产高纯度钼制品的基本原料。比如，热解离钼酸铵生产高纯三氧化钼、用硫化氢硫化钼酸铵溶液生产高纯二硫化钼，通过钼酸铵生产各种含钼的化学试剂等。钼酸铵也常用作生产钼催化剂、钼颜料等钼的化工产品的基本原料。
过氧化物酶的作用过氧化物酶体是由一层单位膜包裹的囊泡,直径约为0.5～1.0μm,通常比线粒体小。
普遍存在于真核生物的各类细胞中,但在肝细胞和肾细胞中数量特别多。过氧化物酶体的标志酶是过氧化氢酶,它的作用主要是将过氧化氢水解。过氧化氢(H2O2)是氧化酶催化的氧化还原反应中产生的细胞毒性物质,"氧化酶和过氧化氢酶都存在于过氧化物酶体中",从而对细胞起保护作用。
过氧化物酶测定酶活性测定
按常规法提取健株与病株的粗酶液，
①用愈创木酚法测定过氧化物酶活性；
②用碘酸钾滴定法测定多酚氧化酶活性；
③用碘量法测定过氧化氢酶活性
:wanfangdata../qikan/periodical.articles/fjlxyxb/980121.htm
过氧化物酶活性测定采用愈创木酚法
:shac.gov./nkrx/kjdt/lwzj/t20040726_106488.htm
请问过氧化物酶和辣根过氧化物酶的区别？后者是指从辣根中提取的一种过氧化物酶
过氧化物酶的活性如何测定过氧化物酶都能把过氧化氢分解成氧气和水...
做法就是定时,定量的过氧化氢,在定量的酶的催化下产生了多少氧气.
过氧化物酶,SOD的作用SOD不是过氧化物酶，是超氧化物歧化酶。它是一种新型酶制剂,在生物界的分布极广,几乎从人到单细胞生物,从动物到植物,都有它的存在。它对于治疗因超氧离子(O_2~(u-))引起的各种疾病均有一定的疗效,尤其治疗类风溼关节炎、红斑痕疮,皮肌炎等均有明显效果。此外,在防辐射,防衰老,抗肿瘤等方面也已进入临床。广告里面的SOD蜜就是有它的成分。
辣根过氧化物酶的活性测定方法过氧化物酶（辣根过氧化酶，181U/mg）溶液（约0℃）：取1.7mg过氧化物酶（Serva, Nr,31943）溶于5ml蒸馏水。
辣根，别名：马萝卜，拉丁学名：Armoracia rusticana.属罂粟目，十字花科、辣根属多年生直立草本。全体无毛。根肉质肥大，纺锤形，白色，下部分枝。茎粗壮，表面有纵沟，多分枝。原产欧洲东部和土耳其，已有2000多年的栽培历史。中国的青岛、上海郊区栽培较早，其他城郊或蔬菜加工基地有少量栽培。根有特殊辣味，含烯丙（基）硫氰酸（C3H5CNS），磨碎后干藏，备作煮牛肉及奶油食品的调料，或切片入罐头中调味。中国自古药用，有利尿、兴奋神经之功效。还具有较强的抗癌效果。
过氧化物酶与氧化酶的作用有何不同过氧化氢酶只是加快过氧化氢分解的，想到于催化剂。过氧化氢酶的作用是使过氧化氢还原成水： 2H2O2=O2↑+ 2H2O
而氧化酶（oxidase）过氧化物酶体中的主要酶类，氧化酶约占过氧化物酶体酶总量的一半。
各种氧化酶作用于不同的底物，其共同特征是氧化底物的同时，将氧还原成过氧化氢：
RH2+ O2→ R+ H2O2
所以它们之间的区别就是一个是分解过氧化氢的，一个是产生过氧化氢的。
抗坏血酸过氧化物酶的定义？一般的酶很难下一个具体的定义，就找到这个，希望对你有帮助。
维生素C过氧化物酶(ascorbate peroxidase,APX)是植物体内的重要酶系,是植物AsA-GSH氧化还原途径的重要组分,是清除H2O2(特别是叶绿体中的H_2O_2)的关键酶。
:emuch./journal/article.php?id=CJFDTotal-SWCX200806050
锰过氧化物酶黄孢原毛平革菌(Phanerochaete Chrysosporium)5．776在初始发酵培养基中产胞外锰过氧化物酶活力极低。为了显著提高锰过氧化物酶活力，对初始发酵培养基进行优化。通过调整培养基中碳源、氮源种类和含量，吐温80新增量，Mn^2+终浓度，静置培养温度、时间，采用分光光度计法测定酶活力，发现黄孢原毛平革菌在限氮高锰培养基中产生较高的锰过氧化物酶。静置液体培养的优化条件是：葡萄糖10g／L；酒石酸铵2mmol／L；吐温80 lg／L；Mn^2+ 9．9μg／L；于34℃静置培养5d；产MnP活力达1200U／L，比优化前提高了近17倍。
四、抗坏血酸被氧化后产物是什么
维生素C是人类膳食中必需的维生素之一，如果缺乏维生素C，将导致坏血病发生。因此，维生素C又称为抗坏血酸，有防治坏血病的功效。抗坏血酸在自然界分布十分广泛，存在于新鲜水果和蔬菜中，尤其是柠檬果实和一些绿色植物（如青辣椒、菠菜等）中含量特别丰富。抗坏血酸在机体同具有广泛的生理功能，已知体内许多重要物质的代谢反应都需要抗坏血酸的参与。它是脯氨酸羟基化酶的辅酶，故有增进胶原蛋白合成的作用。机体中许多含疏基的酶，需要依赖于作为还原剂的抗坏血酸的保护，使酶分子的疏基处于还原状态，从而维持其催化活性。由于抗坏血酸的氧化还原作用，它可促进免疫球蛋白的合成，增强机体的抵抗力。同时还能使氧化型谷胱甘肽转化为还原型谷胱甘肽（简称GSH），而GSH可与重金属结合而排出体外，因此维生素C常用于重金属的解毒。此外，抗坏血酸尚有许多其他生理功能，但其作用机理还不十分清楚。抗坏血酸是一种不饱和的多羟基内酯化合物，稍有酸味的糖类白色晶体，易溶于水，故属于水溶性维生素。在溶液中其分子内C2和C3之间的烯醇式羟基上的氢极易解离并释放出 H+，而被氧化成脱氢抗坏血酸，氧化后仍具有维生素C的生理活性，但它易分解为二酮古洛糖酸，此化合物不再具有维生素C的生理活性。维生素C有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，易被氧化而破坏。还原型和氧化型抗坏血酸可以互相转变，在生物组织中自成一氧化还原系统。由于维生素在营养学和临床方面的重要意义，故对食物和生物材料中维生素含量的测定是十分必须的。抗坏血酸的定量测定方法很多，有2,6—二氯酚靛酚（简称DCIP）滴定法、碘滴定法、2,4—二硝基苯肼法、 Folin试剂比色法、紫外吸收法等。其中广泛采用的是DCIP滴定法，它具有简便、快速、比较准确等优点，适用于许多不同类型样品的分析。缺点是不能直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量，易受其他还原物质的干扰。如果样品中含有色素类物质，将给滴定终点的观察造成困难。在酸性环境中，抗坏血酸（还原型）能将染料2,6—DCIP还原成无色的还原型2,6—DCIP，而抗坏血酸则被氧化成脱氢抗坏血酸。氧化型2,6—DCIP在中性或碱性溶液中呈蓝色，但在酸性溶液中则呈粉红色。因此，当用2,6—DICP滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸未被全部氧化前，滴下的2,6—DCIP立即被还原成无色，一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下微量过剩的2,6—DCIP便立即使溶液显示淡粉红色或微红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的抗坏血酸刚刚全部被氧化。依据滴定时2,6—DCIP标准溶液的消耗量(mL)，可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量。氧化型2,6—DCIP与还原型抗坏血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中进行反应。即先将样品溶于一定浓度的酸性溶液中或经抽提后，再用2,6—DCIP标准溶液滴定至终点。食物和生物材料中常含有其他还原物质，其中有些还原物质可使2,6—DCIP还原脱色。为了消除这些还原物质对定量测定的干扰，可用抗坏血酸氧化酶处理，破坏样品中还原型抗坏血酸后，再用2,6—DCIP滴定样品中其他还原物质。然后从滴定未经酶处理样品时2,6—DCIP标准溶液的总消耗量中，减去滴定非抗坏血酸还原物质2,6—DCIP标准溶液的消耗量，即为滴定抗坏血酸实际所消耗的2,6—DCIP标准溶液的体积，由此可以计算出样品中抗坏血酸的含量。另外，还可利用抗坏血酸和其他还原物质与2,6—DCIP反应速度的差别，并通过控制样品溶液在pH1— 3范围内，进行快速滴定，可以消除或减少其他还原物质的作用，一般在这样的条件下，干扰物质与2,6—DCIP的反应是很慢的或受到抑制。生物体液（如血液、尿等）中的抗坏血酸的测定比较困难，因为这些样品中抗坏血酸的含量很低，并且存在许多还原物质的干扰，同时还必须预先进行脱蛋白处理。在生物体液中含有巯其、亚硫酸盐及硫代硫酸盐等物质，它们都能与DCIP反应，但反应速度比抗坏血酸慢得多。样品中巯基物质对定量测定的干扰，通常可以藉加入对—氯汞苯甲酸(简称PCMB)而得到消除。希望对你有所帮助
